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成都生物所成立基于串联PCR和小分子荧光基团的特异性DNA检测要领

  基于聚合酶链式回响(PCR)的核酸探针技能能敏捷、特异地检测方针DNA序列,然而这些核酸探针,纳米二硫化钨,如Taqman探针、分子信标探针等一般都需要荧光基团和淬灭基团的化学修饰,合成本钱相对奋发,所用到的仪器如及时荧光定量PCR仪,纳米钛粉,较为高端,因此这些要领的普适性不强。

  中国科学院成都生物研究所唐卓课题组的巴基斯坦籍博士后Afshan Yasmeen等人通过研究成立了一种新的基于串联PCR和绿色荧光卵白(GFP)RNA雷同物以及小分子荧光基团的特异性DNA检测要领。该检测要领利用小分子荧光基团作为传感器,不需要对探针举办化学修饰,敏捷度高,特异性强,且能通过机动选择差异RNA适配体和小分子荧光基团获得差异荧光陈诉信号,来实现单个或多个方针DNA的检测。

  该要领道理如下:首先,在对方针DNA举办PCR时,由于Taq DNA聚合酶具有5’-3’的外切酶活性,它能在引物的延伸进程中于探针和方针DNA杂交的位置将探针的5’突出结尾剪切,发生一个小DNA片断。此片断释放出来后可作为回响体系中另一个DNA模板——陈诉模板的引物,进一步启动陈诉模板的PCR。陈诉模板为编码RNA适配体(绿色荧光卵白(GFP)RNA雷同物)的序列,在PCR竣事后,2,5-二疏基-1,3,4-噻二唑,陈诉模板的PCR产品可以转录mRNA,六氟锑酸钠,在相应的荧光基团存在下可以发生荧光信号。该要领已乐成应用于大肠杆菌和产气荚膜梭菌的检测中。

  该事情已颁发在ACS Chemical Biology。

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