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一种双样本混合的t测验(two samples pooled t-test)统计学方法可用于帮助判断两个Ct值的大

  今朝,核酸筛检系统(Nucleic Acids Testing,荧光定量PCR,NAT)已遍及用于血成品通例病原体(乙肝、丙肝、艾滋、梅毒)的核酸检测,极大低落了相关疾病的输血流传。可是,在输血传染性风险中,血小板的细菌污染及相关败血症性输血回响仍是棘手的问题。将核酸筛检技能用于细菌污染检测尚有不少坚苦,包罗:1、细菌污染不像特定病原体,没有统一的尺度品;2、缺少符合的内参质控解除假阳性或假阴性功效;3、核酸扩增聚合酶(Taq)大多是细菌来历,金属脱模剂,带有痕量的细菌核酸身分。

  近期,生物磁珠,中国科学院苏州生物医学工程技能研究所血液免疫学研究中心提出一种双重荧光定量PCR要领可提高细菌污染检测的靠得住性:设计一条人工核酸序列(IRC)作为内参,其特点是IRC与靶基因共用同一对引物举办扩增,别离用差异荧光探针举办检测。通过准确节制IRC分子数到达阳性检出限,链霉亲和素磁珠,以其Ct(i)值作为阈值,只有样本检测的Ct(s)值小于或便是Ct(i)时,检测功效才可认定为阳性。一种双样本混淆的t考试(two samples pooled t-test)统计学要领可用于辅佐判定两个Ct值的巨细。IRC还可以包装成噬菌体,用于监控核酸样本提取进程。

  另外,该双重荧光定量PCR要领可通过别离检测细菌的DNA(脱氧核糖核酸)与RNA(核糖核酸),DNA试剂盒,自保温砌块,计较差异Ct的比值,能判定细菌是处于发展繁殖期可能已经是死菌,从而辅佐判定血成品灭活的结果。该要领不只能用于血成品细菌污染检测,生物磁珠,理论上也能开拓成其他外源基因核酸定量检测的有效要领。

  相关研究功效已颁发在PLOS ONE(2015,纯化蛋白磁珠法医样本DNA提取试剂盒,10(7):e0134743)上。 

  以上事情获得江苏省自然科学基金、苏州市科技专项项目标支持。

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